His抗體能夠特異性識(shí)別His標(biāo)簽，可以用于定性定量檢測(cè)His融合蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位等。為了讓大家詳細(xì)的了解該抗體，下面小編就介紹一下標(biāo)簽抗體進(jìn)行蛋白純化常見(jiàn)的問(wèn)題及解決方法。

　　

　　His抗體蛋白純化常見(jiàn)問(wèn)題：

　　

　　一、蛋白不和介質(zhì)結(jié)合

　　

　　可能原因：超聲功率不合適（太大，蛋白碳化，太小，蛋白沒(méi)*釋放）

　　

　　解決方法：改變超聲功率或者其它方法破碎細(xì)胞。

　　

　　樣品或緩沖液不合適

　　

　　解決方法：確保緩沖液中螯合劑，還原劑，咪唑濃度不是很高。

　　

　　His標(biāo)簽暴露不*

　　

　　解決方法：在緩沖液中加變性劑（4-8M尿素，4-6M鹽酸胍），然后用IMAC介質(zhì)純化。

　　

　　His標(biāo)簽丟失

　　

　　解決方法：必要時(shí)增加His的個(gè)數(shù)并確保正確表達(dá)，同時(shí)降低上樣速度，確保足夠的孵育時(shí)間。

　　

　　二、His抗體蛋白結(jié)合在介質(zhì)上洗脫困難

　　

　　1、可能原因：洗脫條件太溫和

　　

　　解決方法：增加洗脫咪唑濃度或降低pH。

　　

　　2、可能原因：蛋白沉積在介質(zhì)上

　　

　　解決方法：減少上樣量，優(yōu)化層析條件。

　　

　　3、可能原因：非特異性結(jié)合

　　

　　解決方法：緩沖液加2%TritonX-100和NaCl。

　　

　　三、洗脫峰雜質(zhì)多

　　

　　可能原因：非特異性結(jié)合，清洗不*，降解等。

　　

　　解決方法：純化過(guò)程加蛋白抑制劑防止降解，上樣完后要*清洗，加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結(jié)合。

　　

　　四、使用幾次，介質(zhì)結(jié)合效率降低，柱效降低

　　

　　可能原因：介質(zhì)上沉積大量雜質(zhì)等

　　

　　解決方法：*清洗，IDA/IMAC脫鎳再生處理。