鎳Ni柱L00666是大家在蛋白純化中，應(yīng)用較多的一種純化柱料，屬于固定化金屬離子親和色譜中的一種，1975年由Porath等發(fā)明，其間不斷*發(fā)展至今。

　　

　　過(guò)渡金屬通過(guò)與電子供體配基上，能與金屬離子相互作用的羧基或氨基的電負(fù)性元素（O，N），形成較穩(wěn)定的金屬螯合物。在IMAC中，一個(gè)Ni2+有六個(gè)配位位點(diǎn)，被含有3，4或5個(gè)電子供體基團(tuán)（配位位點(diǎn)）的螯合物固定在吸附劑上，而剩下未被占據(jù)的位點(diǎn)暴露于溶液中，能與組氨酸，半胱氨酸，和色氨酸的側(cè)鏈或組氨酸標(biāo)簽的蛋白特異性結(jié)合。

　　

　　IMAC的螯合配基，常見(jiàn)有IDA（亞氨基二乙酸），NTA（次氮基三乙酸），TED（羧甲基乙二胺等，分別擁有3，4，5個(gè)配位位點(diǎn)與Ni2+結(jié)合，而空余的能與組氨酸標(biāo)簽結(jié)合的位點(diǎn)還剩3，2，1個(gè)。

　　

　　所以IDA與His標(biāo)簽蛋白結(jié)合力相對(duì)較強(qiáng)，特異性較弱，而TED則相反。我們?cè)趯?shí)際應(yīng)用中通常選擇載量與特異性適中的NTA類型。

　　

　　鎳Ni柱L00666的洗脫通常采用競(jìng)爭(zhēng)洗脫，先用低濃度的咪唑?qū)㈦s蛋白和結(jié)合不牢的蛋白洗去，再用合適的濃度將目的蛋白洗脫。洗脫的先后順序與蛋白的結(jié)合能力相關(guān)。

　　

　　另外，在鎳Ni柱L00666的使用中，應(yīng)當(dāng)避免緩沖液中存在還原劑和螯合劑，以免Ni2+被還原而脫落。如果柱料使用太久積累了很多雜蛋白，可用EDTA將Ni2+螯合下來(lái)，再用NaOH清洗柱料后，重新螯合Ni離子，即可完成再生。平時(shí)不用時(shí)，應(yīng)保存在20%乙醇中防止長(zhǎng)菌。